Vyf sterkte:
● Instrument gekonfigureer met die nukleïensuurekstraksie en gesuiwerde stap
● Instrument gekonfigureer met ultrasoniese ekstraksie module
● Instrument gekonfigureer met ten volle outomatiese
● Instrument gekonfigureer met veranderlike temperatuurversterking
● Instrument gekonfigureer met volledig ingeslote reagenskit
1. Moet nukleïensuur-opsporingsreagense onttrek en gesuiwer word?
Die beginsel van nukleïensuuropsporing is soos volg: onder die werking van primer word DNA-polimerase gebruik om kettingreaksie-amplifikasie op sjabloon DNA/RNA uit te voer (wat omgekeerde transkripsie van NA vereis), en dan word die hoeveelheid fluoresserende sein wat vrygestel word, opgespoor om te bepaal of die monster die nukleïensuur (DNS/RNA) van die patogeen bevat wat opgespoor moet word.
1) Monsters wat nie onttrek of gesuiwer is nie, kan baie komponente bevat wat die finale resultaat beïnvloed: nuklease (wat die teikennukleïensuur kan oplos en vals negatief kan veroorsaak), protease (wat DNA-polimerase kan verminder en vals negatief kan veroorsaak), swaarmetaal sout (wat lei tot die inaktivering van sintase en vals positiewe veroorsaak), te suur of te alkaliese PH (wat die reaksie kan laat misluk), Onvolledige RNA (wat lei tot vals negatiewe omgekeerde transkripsie mislukking).
2) Sommige monsters is moeilik om direk te versterk: Gram-positief en sommige parasiete, as gevolg van hul dik selwande en ander strukture, as hulle nie deur die nukleïensuur-ekstraksie- en suiweringsproses gaan nie, kan die ekstraksievrye kit misluk vir sulke monsters.
Daarom word dit aanbeveel om die toetsstel of instrument te kies wat met die nukleïensuur-ekstraksiestap gekonfigureer is.
2. Chemiese ekstraksie of fisiese ultrasoniese fragmentasie ekstraksie?
Oor die algemeen kan chemiese ekstraksie op die meeste van die voorbehandeling en suiwering toegepas word.In dikwandige Gram-positiewe bakterieë en sommige parasiete is dit egter ook die geval dat chemiese ekstraksie nie effektiewe nukleïensuursjablone kan verkry nie, wat lei tot vals negatiewe opsporing.Daarbenewens gebruik chemiese ekstraksie dikwels sterk middels, as die eluering nie deeglik is nie, is dit maklik om sterk alkali in die reaksiestelsel in te voer, wat lei tot onakkurate resultate.
Ultrasoniese fragmentasie maak gebruik van fisiese vergruising, wat suksesvol gebruik is deur GeneXpert, 'n toonaangewende onderneming op die gebied van POCT vir menslike gebruik, en het 'n absolute voordeel in nukleïensuuronttrekking van sommige komplekse monsters (soos Mycobacterium tuberculosis).
Daarom word dit aanbeveel om 'n toetsstel of instrument te kies wat gekonfigureer is met 'n nukleïensuur-ekstraksiestap.en dit is optimaal as daar 'n ultrasoniese ekstraksiemodule is.
3. Handmatig, semi-outomaties en ten volle outomaties?
Dit is 'n probleem van arbeidskoste en werkdoeltreffendheid.Tans is troeteldierhospitale sonder genoeg personeel, en nukleïensuuronttrekking en opsporing 'n werk wat sekere vaardighede en ondervinding vereis.Daar is geen twyfel dat die ten volle outomatiese nukleïensuur onttrekking en opsporing masjien is die perfekte keuse.
4. Konstante temperatuurversterking of veranderlike temperatuurversterking?
Die amplifikasiereaksie is 'n nukleïensuur-opsporingsskakel, en die professionele tegnologie betrokke by hierdie skakel is kompleks.Rofweg word ensieme gebruik om die nukleïensuur te versterk.In die versterkingsproses word die versterkte fluoressensiesein of die ingebedde fluoressensiesein opgespoor.Oor die algemeen, hoe vroeër die fluoressensiesein verskyn, hoe groter is die teikengeeninhoud van die monster.
Konstante temperatuurversterking is 'n nukleïensuurversterking teen 'n vaste temperatuur, terwyl veranderlike temperatuurversterking 'n sikliese amplifikasie is streng volgens denaturasie-gloei-uitbreiding.Die konstante temperatuurversterkingstyd is uitgevoer, terwyl veranderlike temperatuurversterkingstyd grootliks beïnvloed word deur die tempo van temperatuurstyging en -daling van die instrument (tans kon baie vervaardigers 40 siklusse van amplifikasie in ongeveer 30 minute doen).
As die laboratoriumtoestande goed is en die sonering streng is, is dit redelik om te sê dat die akkuraatheidsverskil tussen die twee nie groot sal wees nie.Veranderlike temperatuurversterking sal egter meer nukleïensuurprodukte in 'n relatief korter tyd sintetiseer.Vir laboratoriums sonder streng sonering en professionele opleidingspersoneel, sal die risiko van nukleïensuur-aërosollekkasie groter wees, die vals positiewe vind plaas sodra lekkasie plaasvind, en wat uiters moeilik is om uit te skakel.
Daarbenewens is konstante temperatuurversterking ook meer geneig tot nie-spesifieke amplifikasie wanneer die monster kompleks is (die relatiewe reaksietemperatuur is laer, en hoe hoër die verlengingstemperatuur, hoe beter is die onderlaagbindingspesifisiteit).
Wat die huidige tegnologie betref, is veranderlike temperatuurversterking meer betroubaar.
5. Hoe om die risiko van lekkasie van nukleïensuur amplifikasie produkte te vermy?
Tans kies baie vervaardigers die kliertipe PCR-buis as die nukleïensuurreaksiebuis, wat deur wrywing verseël word, en die temperatuurdenaturering in die veranderlike temperatuur-denaturering in die PCR-versterking met veranderlike temperatuur bereik 90 grade
Celsius.Die herhaalde proses van uitbreiding met hitte en sametrekking met koue is 'n groot uitdaging vir die verseëling van die PCR-buis, en die kliertipe PCR-buis is relatief maklik om lekkasie te veroorsaak.
Dit is verkieslik om die reaksie met 'n heeltemal verseëlde stel/buis aan te neem om die lekkasie van die reaksieproduk te voorkom.Dit sal perfek wees as daar 'n volledig verseëlde kit vir nukleïensuuronttrekking en opsporing uitgewerk kan word.
New Tech se nuwe volledig outomatiese nukleïensuur-ekstraksie- en opsporingsmasjien het dus die bogenoemde vyf optimale keuses.
Postyd: Aug-09-2023
